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免疫组化问题解答
1、染色过强?
  • 本 果
  • 解决方法
  • 抗体浓度过高或孵育工夫过长
  • 低落抗体滴度、抗体孵育工夫:室温1小时或4渡过夜
  • 孵育温度过高凌驾37度
  • 一样平常正在室温20-28度
  • DAB显色工夫过长或浓度过高
  • 显色工夫不超过5-12分钟,以显微镜下视察为准
2、非特同性配景染色?
  • 本 果
  • 解决方法
  • 操作过程中冲刷不充分
  • 每步冲刷3次每次5分钟
  • 构造中露过氧化物酶已阻断
  • 可再设置新颖3%H2O2关闭孵育工夫延伸
  • 构造中含内原性生物素
  • 一般非免疫植物血清再关闭
  • 血清卵白关闭不充分
  • 血清卵白关闭不充分
3、染色强?
  • 本 果
  • 解决方法
  • 抗体浓度过低、孵育工夫过短
  • 进步抗体浓度、孵育工夫不克不及少于60分钟
  • 试剂凌驾有用使用时间
  • 应改换试剂
  • 操纵中增加试剂时缓冲液未沥干
  • 每步滴加试剂前沥干切片中过剩的缓冲液
    使试剂稀释 (应防备切片枯燥)
  • 室温太低,低于15度
  • 要改放正在37度孵育箱孵育30-60分钟或4度冰箱留宿
  • 卵白关闭过分
  • 关闭不要凌驾12分钟
4、染色阴性?
  • 本 果
  • 解决方法
  • 操纵步调毛病
  • 应重试,设阳性对比
  • 构造中无抗原
  • 设阳性对比以考证实验效果
  • 一抗取二抗种属衔接毛病
  • 细致肯定一抗二抗种属无误
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