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Western Blotting 问题解答
1、胶片上存在反转印象(如:明的条带、乌的配景)?

缘由:HRP的浓度过高;

处理:稀释HRP最少10倍。

2、膜上有黄色或棕色的堆积?

缘由:HRP的浓度过高;

处理:稀释HRP最少10倍。

3、正在暗室中条带过于通亮?

缘由:HRP的浓度过高;

处理:稀释HRP最少10倍。

4、条带的发光工夫连续了最少8小时?

缘由:HRP的浓度过高;

处理:稀释HRP最少10倍。

5、旌旗灯号太强或没有?

缘由:

1.太多的HRP蕴蓄致使旌旗灯号快速的消弱;

2.抗原或抗体的浓度不敷;

3.转印不成功;

4.HRP或其他底物的效价低落。

处理:

1.稀释HRP最少10倍;

2.增添其浓度;

3.寻觅适宜的转移要领和前提;

4.挑选其他的适宜底物。

6、配景下?

缘由:

1.HRP浓度过高;

2.关闭无效;

3.不适合的关闭试剂;

4.洗涤不充分和洗涤液的量;

5.胶片暴光过分;

6.抗原或抗体的浓度太下。

处理:

1.稀释HRP最少10倍;

2.寻觅适宜的关闭要领;

3.选用其他的关闭试剂;

4.增添洗涤的工夫,次数;

5.削减暴光工夫;

6.稀释抗原或抗体。

7、蛋白质条带上有空泡影像?

缘由:

1.蛋白质没有被充裕转印;

2.膜没有预先浸湿;

3.正在胶片和膜之间有气泡。

处理:

1.寻觅适宜的转移要领和前提;

2.正在转印前充裕浸湿;

3.正在曝光之前赶走气泡。

8、胶片上配景弥散?

缘由:HRP符号的抗体泛起了蕴蓄;

处理:稀释HRP最少10倍。

9、无特异性条带?

缘由:

1.HRP浓度过高;

2.SDS促使非特异蛋白质条带黏附正在目标蛋白质条带上。

处理:

1.稀释HRP最少10倍;

2.正在操作过程中不要加SDS。

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