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多肽的消融取生存

多肽有着许多特性,关于一些特别肽您需求的有关信息可取博奥森公司的技术人员联络。固然起首发起您用少许肽去实验最合适的消融要领,当多肽完整消融后,才气加缓冲液(注重:应将多肽到场到恰当溶剂中搅拌)。

一、冻干多肽的消融

1、多肽消融的重要问题是二级构造的构成。固然疏水肽链二级构造的构成更显着,但除最短的肽链外,此征象发生正在险些一切肽链,取极性无关。以是,消融多肽的第一个原则是运用无菌蒸馏水或去离子水,固然无氧水最好。多肽溶液能够碰到细菌降解,为防备此状况的发作,应消融正在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,应溶于无氧的水中,无氧水可经由过程注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气获得;

2、若多肽不溶于纯水,超声处置惩罚有助于打坏颗粒并增添溶解度。注重:超声处置惩罚会引发溶液发烧或多肽降解;

3、若多肽含有多个碱性氨基酸,运用(1-10%)的乙酸水溶液:关于疏水性强的多肽,应运用50%的乙酸;

4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液消融。pH值正在层析前必需调解;

5、异丙醇和乙腈能消融中等巨细的多肽。若肽要上柱,有机溶剂的量必需很少不然将严峻影响停止工夫;

6、若多肽果含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芬芳链而高度疏水、或为中性肽时,DMF或DMSO等膜变性剂的运用,有利于多肽的消融:

a.下浓度模变性剂经由过程损坏多肽的二级构造而助溶;

b.膜变性剂适于多肽剖析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作形成滋扰;

c.DMF是最好变性剂(最高浓度可达30%),滴加最多肽消融;

d.反相层析法时,DMF将取洗脱液先锋一同流出,凭据入量的若干,峰值能够很下。大多数肽能正在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,多肽的量将很低。

二、冻干多肽的生存

标有“冻干生存”阐明的多肽应当生存正在冰冻条件下,以-20℃以下最好,其活性可连结多年。当运用干冻产物时,开盖前其容器应正在装有新颖干燥箱内升至室温。-20℃的产物,此历程需求一小时或更长,随保装而定。不然,当容器翻开,水气进入致使凝缩而低落稳定性。一旦翻开,应敏捷称量终了,立刻关闭以避免潮解,亲水肽更应注重。

三、消融多肽的生存

多肽溶液比干粉的稳定性差许多,为了得到较好的结果,遵照以下原则:

1、分红小包装制止重复冻融。运用若干解冻若干;

2、溶于pH5-7无菌的缓冲液中,-20℃贮存;

3、因为细菌能降解多肽,贮存前应过滤细菌;

4、包罗Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因而应生存正在无氧化剂的情况中。

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